Əgər ferment immunoassay HİV-i təsdiq etməmişdirsə. ELISA HİV-ə diaqnoz qoymaq üçün etibarlı bir üsuldur. IFA-nı necə və harada götürmək olar. Analizi necə götürmək olar

İnsan immunçatışmazlığı virusu infeksiyası ciddi diaqnozdur. Diaqnozda səhvlər fəlakətli nəticələrə səbəb ola bilər. İİV üçün ELISA analizi ən əlçatan tədqiqat üsuludur, lakin bütün hallarda məlumatlandırıcı deyil.

ELISA - ferment immunoassay. ELISA metodunun vəzifəsi bioloji materialda immun çatışmazlığı virusuna qarşı anticisimləri aşkar etməkdir. Metoddan istifadə edərək mayedə virusların deyil, yalnız onların mövcudluğuna cavab olaraq istehsal olunan antikorların mövcudluğunu izləmək mümkündür. ELISA testi CYBH-lərin diaqnostikasında geniş istifadə olunur. Cinsi yolla keçən xəstəlikləri müəyyən etməyə kömək edir.

ELISA-nın bir neçə növü var: birbaşa variant, dolayı variant, sendviç üsulu. Hər halda, texnika xarici agentin nüfuzunun göstəricisi kimi xidmət edən antikorların mövcudluğunun müəyyən edilməsinə əsaslanır. Bu "izləri" aşkar etmək üçün bioloji komponent fermentlərlə müalicə olunur.

ELISA antikorları 96 - 98% dəqiqliklə aşkar edir, səhv əhəmiyyətsizdir. 2-4% təşkil edir.

ELISA - HİV-in diaqnozu üçün bir üsul

İİV üçün ELISA analizi diaqnozun ilk mərhələsidir. İmmun çatışmazlığı virusunun antigenləri p24, p15, p17, p31 zülalları və gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160 qlikoproteinləridir.

Viral bir zülal aşkar etmək üçün bir damardan qanın bir hissəsi alınır. ELISA qan testi üçün göndərilən nümunə ferment immunoassay reagentləri ilə müalicə olunur. Serum qandan təcrid olunur. Tədqiqat zamanı onlar aşkar edilərsə, virus artıq qanda mövcuddur.

Qan ciddi şəkildə boş bir mədədə verilir. Analizdən 2 gün əvvəl yağlı qidalar yemək və spirtli içki qəbul etmək tövsiyə edilmir. 14 gün ərzində antiviral dərman qəbul etməyi dayandırmalısınız.

Metodun üstünlükləri:

• nisbətən aşağı qiymət;
• reagentlərin yüksək sabitliyi;
• yüksək həssaslıq;
• qısa çatdırılma müddəti;
• insan amilinin minimal təsiri.

ELISA üçün müasir test sistemləri dünya standartlarına uyğun istehsal olunur. Bu, metodun dəqiqliyini artırır.

ELISA həmişə etibarlı nəticələr vermir. Virus qana daxil olduqdan sonra inkişafın gizli (gizli) mərhələsi başlayır. Virusların çoxalmağa başladığı və antikorların hələ əmələ gəlmədiyi dövrə “seroneqativ pəncərə vaxtı” deyilir. Bu mərhələdə ELISA etmək mənasızdır. Bir infeksiya baş veribsə, nəticə olacaq. Virusun özünü nə qədər tez aşkar etməsi bədənə nə qədər təhlükəli hüceyrənin daxil olmasından asılıdır. Qorunmayan cinsi əlaqə və ya yoluxmuş qanın köçürülməsi ilə bu müddət minimal olacaqdır.

HİV üçün ELISA-nın yüksək etibarlılığı üçün tədqiqat üç dəfə aparılır. İnsan immunçatışmazlığı virusu üçün ELISA üçün son tarixlər:

• Ehtimal olunan təmasdan 6 həftə sonra,
• 3 ayda,
• altı ay sonra.

HİV üçün 4-cü nəsil ELISA infeksiyanın erkən mərhələlərində ən məlumatlandırıcı üsuldur. İddia edilən infeksiyadan 1 ay sonra həyata keçirilə bilər. Test 3-cü nəsil analoqu ilə müqayisədə bahadır. Buna görə də dövlət tibb müəssisələrində əlavə diaqnostik üsul kimi istifadə olunur. Sınaq 3 ödənişsiz həyata keçirilir.Onun nəticələrinə əsasən birmənalı cavab vermək mümkün olmadıqda xəstə 4-cü nəsil ELISA-ya göndərilir.

Vacibdir!İnfeksiyadan dərhal sonra bir insan yoluxucu olur. O, başqaları üçün təhlükəlidir, hətta diaqnozundan hələ xəbərsizdir!

ELISA zamanı HİV antigenlərinə qarşı antikorlar aşkar edilərsə, əlavə tədqiqatlar lazımdır. Bunlara aiddir. Bu metodun etibarlılığı 80% -dir. PCR köməyi ilə qan, sperma və vaginal axıntı araşdırılır. Bioloji maye tibbi reaktorda parçalanır, sonra fermentlə müalicəyə məruz qalır. Nəticədə, maye mühitdə HİV hüceyrələrinin konsentrasiyası haqqında məlumatlar əldə edilir. Böyük səhvə görə (20%), müsbət nəticə ilə əlavə olaraq immun blotting aparılır.

Növbəti diaqnostik addım Combo testidir (və ya immun blotting). Bu, yüksək həssas tədqiqatdır (98% güvən) və ELISA nəticələri 6 ayda qeyri-müəyyən olduqda aparılmalıdır.

ELISA nəticələrinin şərhi

Şifrənin açılması müddəti 24 ilə 48 saat arasındadır. Təcili məlumat əldə etmək lazımdırsa (cərrahi müdaxilə tələb olunur), dekodlaşdırma 2 saat ərzində həyata keçirilir. Əyalət tibb məntəqələrində həmişə lazımi reagentlər olmur. Nümunə dövriyyə yerindən götürülür, sonra rayon mərkəzinə verilir. Belə şəraitdə nəticə 1-2 həftəyə bilinə bilər.

Bir ferment immunoassayının nəticəsi müsbət və ya mənfi ola bilər; başqa variant yoxdur.

İlkin və təkrar ELISA zamanı nəticə müsbət olsa belə, xəstə HİV-ə yoluxmuş kimi tanına bilməz. Mümkün səhv. Yanlış müsbət nəticənin səbəbləri:

• xroniki xəstəliklər;
• uzun müddət davam edən yoluxucu xəstəliklər;
• hamiləlik.

Buna görə də təhlilin nəticəsi əlavə tədqiqatlarla aydınlaşdırılmalıdır.

İİV-ə immunoblotinq zamanı (reaktiv) bir şəxs HİV-ə yoluxmuş hesab olunursa, bu, onun sağlam olduğunu göstərir.

Virusun hüceyrələri nəhayət təyin olunan dərmanlara uyğunlaşır. Nəzarət etmək üçün ELISA testi vaxtaşırı təkrarlanır.

Bəzən immunoblotting yanlış mənfi nəticə göstərir. Çox nadir immunçatışmazlığı virusu 6 ay (və ya daha çox). Bu, az miqdarda virus hüceyrəsi qan dövranına daxil olduqda mümkündür. Ümumi halların 0,5% -ində infeksiya yalnız bir ildən sonra müəyyən edilə bilər. 99,5% -də, infeksiyadan sonra altı ay ərzində ELISA etibarlı nəticə verəcəkdir.

Yüksək dəqiqlikli tədqiqatlarda belə, hələ də 2% səhv marjası var. İnsan faktorunu da unutmaq olmaz. Səhv ehtimalını aradan qaldırmaq üçün test 2 fərqli qurumda həyata keçirilə bilər.

Bədənin vəziyyətini hərtərəfli qiymətləndirmək üçün ELISA diaqnostik metodundan istifadə olunur. ELISA qan testi yoluxucu, hematoloji, birincili və ikincil immun çatışmazlıqların diaqnostikası üçün nəzərdə tutulmuşdur.

ELISA analizi nədir

Bir çox xəstə ELISA metodu ilə maraqlanır: bu nədir, nə üçün tədqiqatdır. Enzim immunoassay nisbətən yaxınlarda istifadə edilmişdir. Əvvəlcə antigen strukturları öyrənmək üçün istifadə edildi və yalnız elmi məqsədlər üçün həyata keçirildi. Sonra alimlər belə qənaətə gəldilər ki, fermentlərin köməyi ilə davam edən xəstəliyə cavab olaraq yaranan spesifik anticisimləri müəyyən etmək mümkündür.

Əvvəlcə bu texnikadan yalnız dar profilli tibb müəssisələrində, əsasən qanköçürmə məntəqələrində istifadə olunurdu. İİV infeksiyasının aşkarlanması üçün ELISA üsulu xüsusi əhəmiyyət kəsb edir.

Bu gün bu üsul geniş tətbiq sahəsinə malikdir. Müasir laboratoriyalar ondan diaqnoz qoymaq üçün istifadə edirlər:

• şişlər;
• hormonal pozğunluqlar;
• infeksiyalar;
• xroniki və ya əvvəllər köçürülmüş yoluxucu proseslər;
• helmintlər.

Bədəndə yoluxucu bir proses baş verərsə, bu tip diaqnoz xəstəliyin növünü təyin etmək üçün ən optimal hesab olunur.

Metodun mahiyyəti və onun növləri

ELISA metodu - bu nədir, bu tip tədqiqatın mahiyyəti nədir? Bu və bir çox digər suallar xəstələri maraqlandırır. Bu diaqnostik metodun əsası bədənin immun hüceyrələrinin yoluxucu agentlərin antigenlərinə bağlanmasıdır. Yaranan kompleks xüsusi bir fermentin köməyi ilə müəyyən edilir.

ELISA metodunun prinsipini başa düşmək üçün antigen-antikor reaksiyasının necə getdiyini bilmək lazımdır. Antigen, infeksiya ilə birlikdə daxil olan bədənə yad olan bir protein molekuludur. Qrupda uyğun gəlməyən yad qan hissəcikləri də antigen hesab olunur. Bədəndə yad maddələrdən qorunmağa yönəlmiş bir immunitet reaksiyasına səbəb olurlar. Buna görə də, insan orqanizmi antikorlar - immunoqlobulinlər istehsal edir, antigenlərə qoşula bilir, immun kompleksi yaradır. Belə birləşmələri immun hüceyrələri tərəfindən tanınmaq və məhv etmək çox asandır.

Belə immun komplekslərin olması üçün reaksiya laboratoriyada qanda oxşarların olub olmadığını müəyyən etmək üçün hazır birləşmələrdən istifadə etməklə aparılır.

ELISA metodunun mahiyyəti olduqca sadədir, lakin bir çox infeksiya və xəstəlikləri aşkar etmək üçün qan testi aparıldığı üçün onun bir neçə çeşidi var. Hər biri davranış sxemi və əhatə dairəsi ilə fərqlənir. Birbaşa və ya dolayı ELISA ola bilər. Birbaşa üsul, antigenlərlə reaksiya verən immobilizasiya edilmiş antikorların istifadə edilməsini nəzərdə tutur. Bu metodun əsas üstünlüyü ondan ibarətdir ki, bütün proseslər avtomatlaşdırıla bilər, yəni diaqnostika bir az vaxt aparır.

Dolayı üsul ikincil antikorların istifadə edildiyini nəzərdə tutur. Bərk fazada isə antigen immobilizasiya olunur. Təhlil müxtəlif antigenlərə qarşı antikorları təyin etməyə imkan verir. Bu, daha dəqiq nəticə əldə etməyə kömək edir, lakin üsul mürəkkəbdir.

Təhsil Faydaları

ELISA metodu digər diaqnostik üsullarla müqayisədə bir çox üstünlüklərə malikdir. Əsas olanlara aşağıdakılar daxildir:

• yüksək həssaslıq;
• inqrediyentlərin saxlanması zamanı sabitlik;
• diaqnostika sürəti;
• az miqdarda test materialı istifadə edilə bilər;
• bütün prosesləri avtomatlaşdırmaq mümkündür;
• infeksiya erkən mərhələdə aşkar edilə bilər.

Bu diaqnostik üsul universaldır, buna görə də kütləvi müayinə üçün uygundur. Analizlərin köməyi ilə yoluxucu prosesin gedişatının dinamikasını izləmək mümkündür.

Təhlil və material nümunəsi üçün göstərişlər

ELISA metodundan istifadə edərək bir araşdırma aparmaq, müxtəlif xəstəliklərdən şübhələnildikdə təyin edilə bilər:

Antikorların olması üçün venoz qan araşdırılır. Təhlildən əvvəl tədqiqatı çətinləşdirə biləcək elementlər ondan təcrid olunur. Digər bioloji mayelərdən də nümunə götürülə bilər.

Ən dəqiq məlumatı əldə etmək üçün qan nümunəsi boş bir mədədə aparılır. Prosedura gizli bir infeksiya müəyyən etmək üçün təyin edilmişsə, analizdən bir neçə həftə əvvəl antibakterial və antiviral dərman qəbul etməyi dayandırmalısınız. Materialın götürüldüyü laboratoriyanın avadanlıqlarından asılı olaraq bir gün ərzində nəticə əldə etmək olar. Fövqəladə hallarda bu müddət bir neçə saata endirilir.

Sifilis üçün analiz

ELISA metodundan istifadə bədəndə bir çox infeksiyanın, xüsusən də sifilisin mövcudluğunu müəyyən etməyə kömək edir. Tədqiqat üçün qan boş bir mədədə bir damardan alınır. Sonra yalnız bədəndə xəstəliyin mövcudluğunu deyil, həm də onun başlamasının dəqiq vaxtını təyin etməyə kömək edən bir araşdırma aparılır, çünki xəstəliyin gedişində bəzi antikorlar ciddi şəkildə müəyyən edilmiş qaydada başqaları ilə əvəz olunur.

Xəstəliyin uzun müddət davam etdiyini göstərən kəskin mərhələdə və ya xroniki infeksiyanın kəskinləşməsi zamanı qanda M tip immunoqlobulinlər aşkar ediləcək.A tipli immunoqlobulinlərin olması infeksiyanın orqanizmdə 4 ildən çox yaşadığını göstərir. həftələr. G qrupu immunoglobulinləri xəstəliyin və ya əvvəlki terapiyanın yüksəkliyini göstərir.

Quyuların rəng dərəcəsinə görə, yoluxucu prosesin gedişatının intensivliyi qiymətləndirilir, çünki onun doyması formalaşan immun komplekslərin sayından asılıdır.

HİV testi

ELISA metodu bu vəziyyətdə də təhlil etmək üçün istifadə olunur, xəstəliyin gedişi və inkişafı ilə əlaqəli müəyyən xüsusiyyətlərə malikdir. Bu tədqiqat metodu müəyyən etmək üçün ən məqbul hesab olunur, lakin risk faktorlarına məruz qaldıqdan sonra bir aydan gec olmayaraq aparılmalıdır. Bu, 45 gündən 6 aya qədər davam edən inkubasiya dövrünün olması ilə əlaqədardır. Buna görə də altı aydan sonra analiz təkrarlanmalıdır.

• askaridoz;
• lyamblioz;
• toksoplazmoz və s.

Bütün üstünlüklərə baxmayaraq, ELISA metodunun mənfi cəhətləri də var. Əsas çatışmazlıq ondan ibarətdir ki, tədqiqat apararkən həkim əvvəlcədən xəstəlik haqqında bir fərziyyəyə sahib olmalıdır.

Təsadüfən patogeni tapmaq və onun ferment immunoassay xüsusiyyətlərini müəyyən etmək üçün heç bir yol olmadıqda. Test yalnız xəstənin qanında antikorların mövcudluğunu göstərir. Bundan əlavə, bu olduqca bahalı bir analizdir.

Təhlilin deşifrə edilməsi

Keyfiyyətli ELISA-nın nəticəsi ya antikorların olması, ya da qanda olmaması olacaqdır. Kəmiyyət təhlili aparılırsa, antikorların konsentrasiyası ya ədədi dəyərdə, ya da müəyyən sayda + işarəsi ilə ifadə edilə bilər.

Bundan əlavə, aşağıdakı kimi göstəricilər:

IgM göstəricisi bədəndə kəskin yoluxucu prosesin gedişatını göstərir. Onun tam olmaması xəstəliyin törədicinin olmamasını və ya xroniki mərhələyə keçməsini göstərə bilər.

Mənfi IgM testi ilə IgA oxunması xroniki və ya gizli infeksiya olduğunu göstərir. IgM və IgA-nın eyni vaxtda olması xəstəliyin kəskin mərhələdə olduğunu göstərir. IgG-nin olması xəstəliyin xroniki mərhələyə keçməsini və ya tam sağalmasını və toxunulmazlığın inkişafını göstərir.

İndi özünüz edə biləcəyiniz xüsusi ELISA testləri var.

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA - English) praktiki tibbin həyatına keçən əsrin 60-cı illərində başqa yerdə daxil oldu. Onun ilkin vəzifəsi canlı orqanizmin hüceyrələrinin antigen strukturunun axtarışı və identifikasiyası ilə məhdudlaşan elmi məqsədlər üçün histoloji tədqiqatlar idi.

ELISA metodu xüsusi (AT) və əlaqəli antigenlərin (AG) bir fermentin köməyi ilə aşkar edilən antigen-antikor kompleksinin formalaşması ilə qarşılıqlı əlaqəsinə əsaslanır. Bu fakt alimləri belə bir fikrə gətirdi ki, metod müəyyən infeksiyaya qarşı immun reaksiyasında iştirak edən müxtəlif siniflərin spesifik immunoqlobulinlərini müəyyən etmək üçün diaqnostik məqsədlər üçün istifadə edilə bilər. Və bu, klinik laboratoriya diaqnostikasında bir sıçrayış idi!

Metod yalnız 80-ci illərin əvvəllərində, sonra isə əsasən ixtisaslaşdırılmış müəssisələrdə fəal şəkildə istifadə olunmağa başladı. Qanköçürmə mərkəzləri və stansiyaları, yoluxucu xəstəliklər və veneroloji xəstəxanalar ilk ferment immunoanalizatorları ilə təmin olundu, çünki Afrika qitəsində doğulan dəhşətli QİÇS bizimlə birlikdə üfüqdə göründü və dərhal "köhnə" infeksiyalara qoşuldu, diaqnostika üçün təcili tədbirlər tələb olundu. və ona təsir edən terapevtik dərmanların axtarışı.

ELISA metodunun əhatə dairəsi

Ferment immunoassay imkanları həqiqətən genişdir.İndi tibbin bütün sahələrində sözün həqiqi mənasında istifadə olunan bu cür tədqiqatlar olmadan necə edə biləcəyini təsəvvür etmək çətindir. Deyəsən, ELISA onkologiyada edə bilər? Məlum oldu ki, ola bilər. Və çoxlu. Təhlilin bədxassəli neoplazmaların müəyyən növləri üçün xarakterik olan markerləri tapmaq qabiliyyəti, kiçik ölçüsünə görə başqa üsullarla hələ aşkar edilmədikdə, bir şişin erkən aşkarlanmasının əsasını təşkil edir.

Müasir klinik laboratoriya diaqnostikası (CDL), şiş markerlərinə əlavə olaraq, ELISA üçün əhəmiyyətli panellər arsenalına malikdir və onlardan müxtəlif patoloji vəziyyətlərin (infeksion proseslər, hormonal pozğunluqlar) diaqnostikasında istifadə olunur və onların xəstənin bədəninə təsirini müəyyən etmək üçün əczaçılıq dərmanlarına nəzarət edir. bədən və yeri gəlmişkən, yalnız insan deyil. Hal-hazırda, ferment immunoassay baytarlıq xidmətində geniş istifadə olunur, çünki "bizim kiçik qardaşlarımız" da bəzən çox əziyyət çəkən bir çox xəstəliklərə həssasdırlar.

Beləliklə, ELISA, həssaslığına və spesifikliyinə görə venadan götürülmüş qan nümunəsindən müəyyən edə bilər:

• Hormonal vəziyyət (tiroid və adrenal hormonlar, cinsi hormonlar);
• Viral və bakterial infeksiyanın olması (HİV, B və C, xlamidiya, sifilis, və, həmçinin patogen mikroorqanizmlərin yaratdığı bir çox digər xəstəliklər);
• Uğurla başa çatan və bu patogenə qarşı immun cavabın formalaşması mərhələsinə keçən yoluxucu prosesi başlatan mikroorqanizmlərin həyati fəaliyyətinin izləri. Belə izlər, yəni antikorlar bir çox hallarda qanda ömürlük dövriyyədə qalır ki, bu da insanı təkrar infeksiyadan qoruyur.

IF-in mahiyyəti nədir?

Ferment immunoassay metodu təkcə patogenin özünün (keyfiyyət təhlili) varlığını deyil, həm də xəstənin qan serumunda onun kəmiyyət tərkibini müəyyən etməyə imkan verir.

Viral və ya bakterial doza yoluxucu prosesin gedişatına və onun nəticələrinə əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərir, buna görə də kəmiyyət təhlili müxtəlif forma və mərhələlərdə xəstəliklərin diaqnozu və müalicəsində mühüm rol oynayır.

Bununla belə, fermentlə əlaqəli immunosorbent analizlərini ELISA metodu kimi bildiyimiz üçün onun planetimizdə məskunlaşan, bir çoxu insanların sağlamlığı və həyatı üçün birbaşa təhlükə yaradan bu qədər geniş spektrli mikroorqanizmləri necə əhatə edə bildiyini düşünmürük. heyvanlar. Fakt budur ki, ELISA-nın bir çox variantı var (rəqabətsiz və rəqabətli - birbaşa və dolayı), hər biri öz problemini həll edir və beləliklə, məqsədyönlü axtarışa imkan verir.

Bu və ya digər sinifin immunoqlobulinlərini aşkar etmək üçün, adsorbsiya edilmiş rekombinant zülalların bərk fazada cəmləşdiyi quyularda ənənəvi 96 quyulu polistirol panel (tablet) istifadə olunur. Qan serumu ilə quyuya daxil olan antikorlar və ya antigenlər "tanış" bir obyekt tapır və onunla bir kompleks əmələ gətirir (AG - AT), ferment konjugatı ilə sabitlənir, quyunun rəngində dəyişiklik kimi özünü göstərir. nəticələri oxuyarkən.

Ferment immunoassay xüsusi laboratoriyalarda hazırlanmış və bütün lazımi reaksiya verən komponentlərlə təchiz edilmiş müəyyən spesifikliyə malik test sistemlərində aparılır. Tədqiqatlar yuyuculardan ("yuyucular") və ən çox əl əməyinin cəlb edildiyi spektrofotometrlərin oxunmasından istifadə etməklə aparıla bilər. Laborantı monoton instillasiya, yuyulma və digər gündəlik işlərdən azad edən tam avtomatik maşınlarda, əlbəttə ki, işləmək daha sürətli və daha rahatdır, lakin bütün laboratoriyalar belə lüksü ödəyə bilmir və köhnə üsulla işləməyə davam edir. - yarı avtomatik cihazlarda.

ELISA nəticələrinin təfsiri laboratoriya diaqnostikası doktorunun səlahiyyətindədir, demək olar ki, bütün immunokimyəvi reaksiyalara yanlış müsbət və ya yanlış mənfi cavablar vermək xüsusiyyəti mütləq nəzərə alınır.

Video: müasir ferment immunoassay

ELISA sifilis nümunəsi ilə nəticələnir

ELISA bütün formaların aşkarlanması üçün uyğundur, və əlavə olaraq, skrininq tədqiqatlarında istifadə olunur. Təhlil üçün boş bir mədədə alınan xəstənin venoz qanı istifadə olunur. İşdə müəyyən bir spesifikliyi olan plitələr (AT sinifləri A, M, G) və ya ümumi antikorlar istifadə olunur.

Sifilisdə antikorların müəyyən bir ardıcıllıqla istehsal olunduğunu nəzərə alsaq, ELISA infeksiyanın nə vaxt baş verdiyi və prosesin hansı mərhələdə olduğu sualına asanlıqla cavab verə bilər və əldə edilən nəticələrin dekodlanması aşağıdakı formada təqdim edilə bilər:

• IgM yoluxucu prosesin müddətini göstərir (xroniki iltihablı xəstəliklərin kəskinləşməsi zamanı görünə bilər);
• IgA infeksiyanın bir aydan çox əvvəl baş verdiyini bildirir;
• IgG infeksiyanın tam sürətlə davam etdiyini və ya son müalicəni göstərir ki, bu da anamnez toplayan zaman asanlıqla aşkar edilir.

Sifilis üçün test zamanı mənfi quyular (və mənfi nəzarət) rəngsiz qalacaq, müsbət (müsbət nəzarət kimi) isə test zamanı əlavə edilən xromogenin rənginin dəyişməsi səbəbindən parlaq sarı rəng göstərəcək. Bununla belə, rəngin intensivliyi həmişə nəzarətə uyğun gəlmir, yəni bir qədər solğun və ya bir qədər sarımtıl ola bilər. Bunlar, bir qayda olaraq, bir spektrofotometrdə alınan kəmiyyət göstəricilərinin məcburi nəzərə alınması ilə yenidən yoxlanılan şübhəli nəticələrdir, lakin ümumiyyətlə, rəng immun komplekslərin (antigenlər və antikorlarla əlaqəli) sayı ilə birbaşa mütənasibdir. bir-birinə).

Enzim immunoassays ən maraqlı - HİV üçün ELISA

Bununla bağlı təhlil, bəlkə də, digərlərindən daha çox əhalinin geniş təbəqəsini maraqlandırır, çünki bir çox sosial problemlərin (fahişəlik, narkomaniya və s.) aradan qalxdığını hələ əminliklə söyləmək mümkün deyil. Təəssüf ki, HİV yalnız insan cəmiyyətinin bu təbəqələrinə təsir etmir, cinsi azğınlıq və ya narkotik istifadəsi ilə əlaqəli olmayan müxtəlif şərtlər altında yoluxa bilərsiniz. Ancaq HİV testinə ehtiyac varsa, ətrafdakıların belə bir laboratoriyaya baş çəkməyi öyrənəcəyindən qorxmamalısınız. İndi HİV-ə yoluxmuş insanlar qanunla qorunur və şübhəsi olanlar anonim ofislərə müraciət edə bilərlər ki, onlar aşkarlıq və qınaqdan qorxmadan problemi həll edə bilərlər.

İİV infeksiyasının diaqnostikasında istifadə olunan immunoassay fermenti əsas standart tədqiqatlardan biridir, lakin mövzu çox həssas olduğundan xüsusi şərtlər tələb olunur.

HİV-ə qarşı ELISA-nın cinsi əlaqə, qanköçürmə, infeksiya ilə əlaqəli digər tibbi prosedurlardan sonra və inkubasiya dövrünün sonunda (“seroneqativ pəncərə”) aparılması məna kəsb edir, lakin nəzərə almaq lazımdır ki, bu müddət daimi deyil. 14-30 gün ərzində bitə bilər və ya altı aya qədər davam edə bilər, buna görə orta dəyər 45 ilə 90 gün arasında bir interval hesab olunur. HİV-ə qan digər infeksiyalar üçün olduğu kimi - boş bir mədədə bir damardan verilir. Laboratoriyada materialın yığılmasından və onun iş yükündən (2 gündən 10 günə qədər) asılı olaraq nəticələr hazır olacaq, baxmayaraq ki, əksər laboratoriyalar eyni gündə və ya növbəti gün cavab verir.

HİV nəticələrindən nə gözləmək olar?

HİV infeksiyası üçün ELISA iki növ virusa qarşı antikorları aşkar edir: HİV-1 (Rusiya və digər Avropa və Asiya ölkələrində daha çox yayılmışdır) və HİV-2 (Qərbi Afrikada daha çox yayılmışdır).

HİV ELISA-nın vəzifəsi bütün test sistemlərində aşkar edilən, lakin sonrakı dövrdə aşkar edilən G sinfi anticisimləri və yeni nəsil rekombinant test dəstlərində aşkar edilən A və M sinif antikorlarını axtarmaqdır ki, bu da antikorları aşkar etməyə imkan verir. ən erkən mərhələlər (inkubasiya dövrü seroneqativ pəncərədir). ELISA-dan aşağıdakı cavabları gözləmək olar:

1. İlkin müsbət nəticə: qan eyni tipli, lakin mümkünsə fərqli seriyalı və başqa bir şəxs (laborant) tərəfindən test sistemində təkrar yoxlanılmalıdır;
2. Təkrarlanan (+) ilkin analizə bənzər bir araşdırma ilə xəstədən yeni qan nümunəsi götürməyi nəzərdə tutur;
3. Növbəti müsbət nəticə yüksək spesifik test dəstlərindən (2-3 ədəd) istifadə edən istinad analizinə məruz qalır;
4. Hər iki (və ya üç) sistemdə müsbət nəticə immunoblotting üçün göndərilir (eyni ELISA, lakin xüsusilə yüksək spesifiklik test dəstlərində fərdi olaraq həyata keçirilir).

İİV infeksiyası haqqında nəticə yalnız immunoblotinq əsasında verilir. Yoluxmuş şəxslə söhbət tam məxfilik şəraitində aparılır. Digər ölkələrdə olduğu kimi Rusiyada da tibbi sirri açıqlamaq cinayət məsuliyyətinə cəlb olunur.

Enzim immunoassay üsulu ilə xlamidiya və sitomeqalovirus üçün testlər də infeksiya vaxtını, xəstəliyin mərhələsini və terapevtik tədbirlərin effektivliyini təyin etməyə imkan verdiyinə görə xüsusi populyarlıq qazanmışdır.

Giriş zamanı müxtəlif siniflərin antikorlarının görünüşünü də müşahidə etmək mümkündür. bir yoluxucu agentin səbəb olduğu patoloji vəziyyətin müxtəlif mərhələlərində:

• IgM infeksiyadan yeddi gün sonra aşkar edilə bilər;
• IgA, infeksiyanın bədəndə bir aydan çox yaşadığını göstərir;
• IgG xlamidiya diaqnozunu təsdiqləyir, müalicəni izləməyə və effektivliyini təyin etməyə kömək edir. Qeyd etmək lazımdır ki, G sinif antikorları xəstəliyin müddətindən asılı olmayaraq bədəndə qalır və dövr edir, buna görə də analizin düzgün şərh edilməsi üçün istinad dəyərləri (normalar) nəzərə alınmalıdır ki, bu da üsul, hər bir CDL üçün fərqlidir: sınaq sisteminin markasını və dəstdə olan reagentlərin spesifikliyini nəzərə alaraq. Norm dəyərləri ELISA nəticəsinin yanındakı formaya daxil edilir.

O ki qaldı, burada bir az fərqlidir: M sinif antikorları təxminən bir ay yarımdan sonra görünür, yəni müsbət nəticə (IgM +) ilkin infeksiya mərhələsində və ya gizli infeksiyanın yenidən aktivləşməsi zamanı olur və 4 aydan altı aya qədər qalır.

Birincil kəskin infeksiya və ya təkrar infeksiyanın başlanğıcı üçün G sinif antikorlarının olması xarakterikdir. Təhlildə virusun mövcud olduğu bildirilir, lakin yoluxucu prosesin hansı mərhələdə olduğu barədə məlumat verilmir. Eyni zamanda, IgG titrinin normasının müəyyən edilməsi də çətinliklərə səbəb olur, çünki bu, tamamilə müəyyən bir insanın immun statusundan asılıdır, lakin bu, G sinif immunoqlobulinlərinin aşkarlanması ilə müəyyən edilir.Antikorların bu davranışını nəzərə alaraq, CMVI diaqnozu qoyularkən, bu olur. G sinif antikorlarının CMV ilə qarşılıqlı əlaqədə olmaq qabiliyyətini qiymətləndirmək üçün, onu sonradan "zərərsizləşdirmək" üçün lazımdır (AT avidliyi). Xəstəliyin ilkin mərhələsində IgG-lər virusun antigenləri ilə çox zəif birləşir (avidlik aşağıdır) və yalnız bundan sonra aktivlik göstərməyə başlayır, buna görə də antikorların avidliyinin artması haqqında danışmaq olar.

Ferment immunoassayının üstünlükləri haqqında uzun müddət danışa bilərik, çünki bu üsul yalnız venoz qandan istifadə edərək bir çox diaqnostik problemləri həll etməyə müvəffəq olmuşdur. Tədqiqat üçün material götürməklə bağlı uzun gözləmələrə, narahatlıqlara və problemlərə ehtiyac yoxdur. Bundan əlavə, ELISA üçün test sistemləri təkmilləşməyə davam edir və testin nəticənin 100% etibarlılığını verəcəyi gün uzaqda deyil.

Video: Moskva Dövlət Tibb Universitetinin tədris filmi. Seçenov ELISA-nın əsasları haqqında

A.P. OBRYADINA, T.I. ULANOVA
"Diaqnostika Sistemləri" Elmi-İstehsalat Birliyi MMC,

Nijni Novqorod
Kəskin və Xroniki HEPATİT B-nin XÜSUSİ DİAQNOZU VƏ NƏTİCƏLƏRİNİN PROQNOZLANMASI ÜÇÜN "DS-ELISA-HBeAg" və "DS-ELISA-anti-HBe" ferment immun test SİSTEMLERİ
Hepatit B ağır formada səciyyələnən viral yoluxucu xəstəlikdir

iltihablı qaraciyər xəstəliyi. Ölümlərin təxminən 1% -də baş verir

xəstəliyin kəskin dövrü, 4-10% hallarda xroniki bir çevrilmə var

sonrakı qaraciyər sirozunun mümkün formalaşması ilə proses və birincil

hepatokarsinomalar.

Kəskin hepatit B-yə yoluxma hallarının azalması tendensiyasına baxmayaraq, ilk dəfə xroniki viruslu hepatit diaqnozu qoyulmuş xəstələrin epidemioloji cəhətdən təhlükəli qrupu, həmçinin xəstəliyin törədicisinin daşıyıcıları qrupu formalaşmaqda davam edir. Əlverişsiz proqnoz reproduktiv yaşda olan əhali, eləcə də yeniyetmələr arasında hepatit B-nin yüksək halları ilə əlaqəli olaraq qalır.

Buna görə də hepatit B-nin müalicəsi, profilaktikası və diaqnostikası məsələləri indi xüsusi aktuallıq kəsb edir.Hazırda bu infeksiyanın markerlərini aşkar etmək üçün ferment immunoassay üsullarından geniş istifadə olunur. HBV-nin ən mühüm seroloji markerlərinə e-antigen (HBeAg) və e-antigenə (anti-HBe) qarşı antikorlar daxildir. HBeAg yüksək qan infeksiyası ilə əlaqələndirilir ki, bu da hepatit B virusunun (HBV) aktiv replikasiyasını göstərir. Müəyyən edilmişdir ki, yüksək HBeAg titrləri yüksək DNT polimeraz aktivliyinə uyğundur və həmişə tam Dane hissəciklərinin aşkarlanması ilə birləşdirilir. Tərkibində HBeAg olan zərdab sağlam bir insanın qanına daxil olduqda, infeksiya riski serokonversiyadan sonra olduğundan qat-qat yüksəkdir.

Kəskin hepatit B-də HBeAg qanda yoluxucu prosesin ilkin mərhələlərində artıq xəstəliyin ilk klinik təzahürlərində, HBsAg-in görünüşündən bir həftə geridə aşkar edilir. Tsiklik gedişatlı kəskin hepatit B (AHB) HBeAg-nin qısamüddətli dövranı ilə xarakterizə olunur. Tezliklə, ikterik dövrün 2-3 həftəsində anti-HBe görünür ki, bu da xəstəliyin əlverişli nəticəsini proqnozlaşdırmağa imkan verir.

Anti-HBe qanda 2-5 il, daha az tez-tez bir neçə ay dövr edir.

HBeAg-antiHBe serokonversiyasının başlaması aktivliyin kəskin azalmasına işarə edir.

yoluxucu proses. Xəstəliyin 2 ayından sonra xəstələrin qanında HBeAg-nin aşkarlanması patoloji prosesin xroniki olduğunu göstərir. Bu halda anti-HBe HBcAg-ə qarşı anticisimlərin görünməsindən uzun illər sonra əmələ gələ bilər və ya heç aşkarlanmaya bilər.

Anti-HBe-nin görünüşü mənfi proqnostik dəyərə malik ola bilər

ilə pre-core zonasında bir mutasiya uyğundur ağır formalarda HBV kəskin dövrü

HBV "e-" ştammının formalaşması.

məqsəd Bu işin inkişafı son dərəcə həssas və spesifik idi

HBeAg və anti-HBe aşkar etmək və onların əsas xüsusiyyətlərini qiymətləndirmək üçün ELISA test sistemləri.

Materiallar və metodlar.

1. "DS-ELISA-HBeAg" ferment immunoassay test sistemi. Etibarlı sınaq başlanğıcı

NPO Diagnosty Systems, Nijni Novqorod tərəfindən istehsal olunan, bərk fazada adsorbsiya edilmiş rekombinant HBeAg-ə keçi poliklonal anticisimləri və NPO Diaqnostik Sistemləri tərəfindən istehsal olunan, horseradish peroksidaza ilə işarələnmiş, rekombinant HBeAg-ə keçi poliklonal antikorları olan konjugatdır. Təhlil sxemi bir mərhələli "sendviç"dir.Ümumi reaksiya müddəti 1,5 saatdır. Serum nümunəsi seyreltilmədən təhlil edilir.

2. ELISA test sistemi "DS-ELISA-anti-HBe". Testin əsası

NPO Diagnostic Systems tərəfindən istehsal olunan rekombinant HBeAg (AHBV 102),

Nijni Novqorod, bərk fazada adsorbsiya edilmiş və Moskva Sorbent Service tərəfindən istehsal olunan horseradish peroksidaza ilə anti-IgG konjugatı. Reaksiya iki mərhələdə baş verir. Test zərdabı immobilizasiya edilmiş antigenə 1/10 nisbətində seyreltmə ilə əlavə edilir və inkubasiyadan və bağlanmamış komponentlərin çıxarılmasından sonra, horseradish peroksidazı ilə işarələnmiş insan IgG-yə qarşı siçan monoklonal anticisimlərindən istifadə etməklə spesifik immunokomplekslər aşkar edilir.

3. Hazırlanmış test sistemlərinin qiymətləndirilməsi üçün 2178 zərdab nümunəsindən istifadə edilmişdir

qan. Bunlardan 480 nümunə sağlam donorlardan olub. 1680 nümunə təmsil edir

hepatit B virusunun müxtəlif markerlərini ehtiva edən qan serum nümunələridir.

Kəskin viral hepatit B kliniki diaqnozu olan xəstələrdən zamanla on səkkiz nümunə əldə edilmişdir. Əvvəllər bütün nümunələr NPO Diagnostic Systems, Nijni Novqorod tərəfindən istehsal olunan test sistemlərindən istifadə edərək HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc varlığı üçün sınaqdan keçirilmişdir: "ELISA-HBsAg / m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. İstifadə etməklə hazırlanmış test sistemlərinin müqayisəli qiymətləndirilməsi aparılmışdır

BIO-RAD, Fransa istehsalı olan "Monolisa HBe" kommersiya dərmanı;

Nəticələr və müzakirə."Diaqnostika Sistemləri" NPO 2 yeni diaqnostik dəst hazırlayıb: "DS-ELISA-HBeAg" və "DS-ELISA-anti-HBe". "DS-ELISA-HBeAg" test sistemi insan qanının zərdabında (plazmasında) hepatit B virusunun e-antigenini ferment immunoassay yolu ilə aşkar etmək üçün nəzərdə tutulmuşdur və infeksion prosesin aktivliyini təyin edən spesifik diaqnostika üçün istifadə oluna bilər. , hepatit B-nin şiddətini və nəticəsini proqnozlaşdırmaq.

"DS-ELISA-anti-HBe" test sistemi insan zərdabında (plazmasında) hepatit B virusunun e-antigeninə qarşı IgG anticisimlərini aşkar etmək üçün nəzərdə tutulmuşdur və

yoluxucu prosesin gedişatını proqnozlaşdırmaq və hepatit B üçün davam edən terapiyaya nəzarət etmək üçün istifadə olunur.

Yeni testlərin spesifikliyini öyrənmək üçün paylanma təxmin edildi

ehtiva edən və olmayan qan serum nümunələrinin optik sıxlığı (OD).

HBeAg və ya anti-HBe. Sağlam donorlardan qan zərdab nümunələri və hepatit B virusunun müxtəlif markerləri üçün seçilmiş qan zərdab nümunələri istifadə edilmişdir.

qanköçürmə stansiyaları. Tədqiqatın nəticələri iki populyasiyanın əhəmiyyətli dərəcədə ayrıldığını göstərdi. HBeAg olmayan serum nümunələrinin OD dəyərləri 0,011 ilə 0,111 arasında dəyişdi və HBeAg olan serum nümunələrinin əsas zirvəsi 2,186 ilə 3,186 arasında dəyişdi (Şəkil 1a).

Şəkil 1a. Tərkibində olan və olmayan serum nümunələrinin OD-nin paylanmasıHBeAgtest sistemində "DS-ELISA-HBeAg»
Aşağı OD (0,3-0,6) olan zərdablar qrupuna uyğun gələn pik, çox güman ki, yoluxucu prosesin ilkin mərhələlərində götürülən sera nümunələridir.

Artıq inkubasiya dövründə xəstələrin qanında HBsAg və HBeAg müntəzəm olaraq qeydə alınır ki, bu da onların potensial epidemioloji təhlükəsini təsdiqləyir.

Anti-HBe ehtiva etməyən serum nümunələrinin optik sıxlıq diapazonu

0,002 ilə 0,122 diapazonunda idi və anti-HBe ehtiva edən serum nümunələrinin əsas pik OD 2,431 ilə 3,231 arasında idi (Şəkil 1b).

düyü. 1b. Anti-H olan və olmayan serum nümunələrinin OD-nin paylanmasıolun, test sistemində "DS-ELISA-anti-HBeAg»
Anti-HBe müsbət nümunələrinin OD-nin paylanması xüsusiyyətləri öyrənilmişdir.

olan serum ( n=78) və tərkibində HBsAg yoxdur ( n=56).


düyü. 2a. HBe-müsbət sera nümunələri ehtiva edirHBsAgtest sistemində "DS-ELISA-anti-HBe».

Şəkil 2b. OP əleyhinə paylama xüsusiyyətləriHBe-tərkibində olmayan müsbət sera nümunələri HBsAgtest sistemində "DS-ELISA-anti-HBe».
HBsAg olmayan anti-HBe-müsbət zərdab nümunələrinin 87%-nin optik sıxlığı 0,41-0,81 arasında dəyişdi (Şəkil 2b). Eyni zamanda, tərkibində HBsAg olan anti-HBe-müsbət sera nümunələrinin yalnız 14%-də bu diapazonda OD var (Şəkil 2a). Məlumdur ki, HBsAg-ə mənfi reaksiya ilə gec sağalma fazasında HBeAg-a qarşı anticisim titrlərinin tədricən azalması müşahidə olunur (Şəkil 2b). Buna görə də, anti-HBe-müsbət nümunələrin üstünlük təşkil edən konsentrasiyasının OD-yə 0,8-dən az uyğun olması mümkündür.

Əldə edilən məlumatlar müsbət və ayrılmasının etibarlılığını göstərir

xəstəliyin mərhələsindən asılı olmayaraq mənfi qan serum nümunələri. “DS-ELISA-HBeAg” və “DS-ELISA-antiHBe” test sistemlərinin həssaslığının və spesifikliyinin öyrənilməsi “Monolisa HBe” (“BIORAD”, Fransa) sınağı ilə müqayisədə aparılmışdır (cədvəl 1).

Cədvəl 1
Həssaslıq və spesifikliyin müqayisəli xüsusiyyətləri

test sistemləri DS-ELISA-HBeAg və DS-ELISA-antiHB

Cədvəl 1-də göstərilən məlumatlar nəticələr arasında 100% uyğunluğu göstərir.

Məlumdur ki, HBeAg və anti-HBe-nin birləşmiş göstəricisi, xüsusilə onların kəmiyyət qiymətləndirilməsi əlavə proqnostik dəyərə malikdir. Anti-HBe titrində sürətli artım aktiv humoral immun cavabı xarakterizə edir və xronikilik təhlükəsini faktiki olaraq aradan qaldırır. Kəskin viral hepatit B kliniki diaqnozu olan xəstələrin qan zərdab nümunələrində HBeAg/anti-HBe tərkibinin dəyişməsini təhlil etdik (cədvəl 2).

cədvəl 2
Kəskin hepatit B olan xəstələrdə HBeAg/anti-HBe serokonversiyasının dinamikası

* xəstəxanaya qəbuldan
Bütün sera nümunələri seroloji markerlərin olub-olmaması üçün sınaqdan keçirilmişdir.

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Müşahidə müddəti 13 ilə 38 gün arasında dəyişdi. 1, 2 və 6 nömrəli xəstələrdə artıq HBeAg titrinin azalması fonunda anti-HBe aşkar edilmişdir. 3 və 4 nömrəli xəstələrdə anti-HBe müvafiq olaraq 21 və 8-ci günlərdə qan serumundan HBeAg yox olduqdan sonra ortaya çıxdı. 5 saylı xəstənin xəstəxanaya daxil olduqdan sonra qan zərdabında HBeAg aşkarlanmasının təhlili mənfi nəticə göstərib. Eyni zamanda, anti-HBe-yə çevrilmə artıq imtahanın ilk günündə qeydə alınıb.

Bütün subyektlər HBeAg-a qarşı antikorların titrində artım tendensiyası göstərdilər

qan serumu, klinikanın əlverişli dinamikasını proqnozlaşdırmağa imkan verir

OGV təzahürləri və sürətli bərpa.

Yeni test sistemlərinin tədqiqi onların yüksək diaqnostik etibarlılığını göstərdi. DS-ELISA-HBeAg və "DS-ELISA-antiHBe"nin müqayisəsinin nəticələri "Monolisa HBe" testi ilə 100% uyğun olduğunu göstərdi.

Hepatit B olan xəstələrin zərdab nümunələrinin dinamikasında öyrənilməsində, testlərdə

yüksək həssaslıq və spesifikliyi təsdiqlədi.

Test nümunələrinin və konjugatın qısa inkubasiya müddəti (1 saat) mümkün olan ən qısa müddətdə terapevtik tədbirlərin aparılması üçün düzgün taktikanı təyin etməyə imkan verir. Yaradılmış test sistemlərinin qurulması asan, qənaətcildir (HBeAg-nin təyini üçün 50 µl serum və anti-HBe-nin təyini üçün 10 µl serum tələb olunur). Testlərin yüksək keyfiyyət xüsusiyyətləri yoluxucu prosesin gedişatını proqnozlaşdırmaq və hepatit B üçün davam edən terapiyaya nəzarət etmək üçün onlardan uğurla istifadə etməyə imkan verir.
ƏDƏBİYYAT

1.Mayer K.P. Hepatit və hepatitin nəticələri / K.P. Mayer.– M., GEOTAR, Tibb, 1999.- C.720

2.Onishchenko G.G. Viral hepatitin yayılması milli təhlükəsizliyə təhdid kimi / G.G. Onişenko, L.A. Dementieva // Mikrobiologiya jurnalı. –2003.-No 4.- S.93-99.

3.Sorinson S.N. Viral hepatit / S.N.Sorinson. - Sankt-Peterburq, Təzə, 1997.- 306 s.

4. Baumeister M. Hepatit B Virusu və Antigen Xüsusi Epitopları və Ticarət Anti-HBe İmmunoanalizlərinin Məhdudiyyətləri / M. Baumeister // Tibbi Virologiya Jurnalı.- 2000.-N 60.- S.256-263.

5.Keyn M. Hepatit B infeksiyasına nəzarət üzrə qlobal proqram / M. Kane// Peyvənd. - 1995.-N131(Əlavə 1).- R.47-6. Shunichi Senthaqqında. Fulminant Hepatiti Olan Xəstələrdə Əsas Promotorda Mutasiyalar olan Hepatit B Virusunun Ştammları / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Daxili Tibb Salnamələri. - 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-H. Hepatit B virusu və antigeninin molekulyar biologiyası./ J.-H.Ou // Qastroenterologiya və Hepatologiya jurnalı. - 1997.- No 12 (Əlavə 1) - R. 178-187.

8.Tiollais P. Hepatit B virusu. / P.Tiollais, C.Poursel, A.Dejean // Təbiət. - 1985. - S.317, 489-495
Nəşr: Zh. "Klinik laboratoriya diaqnostikası" - 2005.-№6-S.-34-37

1 Tapşırığı təyin edin

1.1 Dəst insan zərdabında və plazmasında “in vitro”da birinci və ikinci növ insanın immunçatışmazlığı virusuna (HİV-1 və HİV-2) və HİV-1 p24 antigeninə qarşı anticisimlərin dolayı ferment vasitəsilə eyni vaxtda aşkarlanması üçün nəzərdə tutulmuşdur. əlaqəli immunosorbent analizi.

2 Kompleksin xarakteristikası və iş prinsipi

2.1 Kompozisiya dəsti:

2.2 "ELISA-HIV 1.2 AGAT" dəstinin əsas komponentləri immunosorbent, 1 nömrəli konjugat məhlulu və 2 nömrəli konjugatdır.

İmmunosorbent polistirol tabletdir, onun quyularında rekombinant HİV-1 (gp41) və HİV-2 (gp36) antigenləri və HİV-1 p24 antigeninə monoklonal antikorların qarışığı adsorbsiya olunur.

Konjugat həll №1 HİV-1 p24 antigeninə və biotinlə işarələnmiş rekombinant HİV-1 və HİV-2 zülallarına qarşı biotin etiketli monoklonal insan antikorlarının qarışığıdır.

Konjugat # 2 Horseradish peroksidaza ilə konjuge edilmiş streptavidindir.

Müsbət nəzarət nümunəsi AT- tərkibində HİV-1 və HİV-2-yə qarşı anticisimlər olan, tərkibində hepatit C virusuna və Treponema pallidum, HİV-1 p24 antigeni və HBs antigeninə qarşı anticisimlər olmayan, 56 ºC temperaturda 3 saat qızdırılmaqla inaktivləşdirilmiş insan qan zərdabı.

Müsbət nəzarət nümunəsi AG– tərkibində HİV-1, HİV-2, hepatit C virusu və Treponema pallidum və HBs antigeninə qarşı antikorları olmayan, 56 ºC temperaturda 3 saat qızdırılmaqla inaktivləşdirilmiş, yerli p24 HİV-1 antigeni olan insan qan serumu.

Mənfi nəzarət nümunəsi– HİV-1, HİV-2, HCV, HİV-1 p24 antigeninə və HBs antigeninə qarşı antikorları olmayan, 56 ºC temperaturda 3 saat qızdırılmaqla inaktivləşdirilmiş insan qan zərdabı.

Dəstənin işləmə prinsipi. 1 nömrəli konyuqatın məhlulu və yoluxmuş qanın zərdab nümunələri tabletin quyularına əlavə edildikdə, p24 antigeni həm bərk fazada olan spesifik anticisimlərə, həm də konyuqat məhlulunun bir hissəsi olan monoklonal biotinilləşdirilmiş anti-p24 anticisimlərinə bağlanır. № 1; HİV-ə spesifik anticisimlər həm bərk fazada adsorbsiya edilmiş rekombinant HİV-1 və HİV-2 antigenləri ilə, həm də 1 nömrəli konyuqa məhluluna daxil olan antigenlərlə birləşərək antigen-antikor komplekslərini əmələ gətirir. Anti-p24 spesifik antikorlarının və p24 antigeninin immun kompleksləri 2 nömrəli konjugat tərəfindən aşkar edilir. Bağlanmamış komponentlər yuyulduqdan sonra plitənin quyularına peroksidaza substratının (hidrogen peroksid) və TMB xromogeninin məhlulu əlavə edilir.

Peroksidaza reaksiyası dayandırıcı reagent (0,9 M sulfat turşusu məhlulu) əlavə edilməklə dayandırılır və quyularda məhlulun rəng intensivliyi 450 nm dalğa uzunluğunda optik sıxlıq (OD) dəyəri kimi spektrofotometrdə ölçülür.

OD dəyəri serum və ya plazma nümunəsində spesifik antikorların və/və ya p24 antigeninin konsentrasiyası ilə birbaşa mütənasibdir. Serum nümunəsində antikorların və/və ya p24 antigeninin tərkibi nə qədər yüksək olarsa, boyanma intensivliyi bir o qədər yüksək olar.

2.3 Dəst tutmaq üçün tutmaq üçün nəzərdə tutulmuşdur 24 istehsal ELISA: 1 parametr - 1 zolaq (8 deşik). Ümumi - 192 təriflər nəzarət nümunələri də daxil olmaqla.

3 Kitdən istifadə edərkən ehtiyat tədbirləri

3.1 İstifadə olunan konsentrasiyalarda dəstin bütün komponentləri toksik deyildir. Bununla belə, potensial yoluxmuş hesab edilməli, HİV, hepatit B virusu və ya virus infeksiyasının hər hansı digər patogenini saxlamağa və ötürməyə qadir olan insan zərdabının (plazmasının) bütün sınaqdan keçirilmiş nümunələri ilə, sərf olunmuş məhlullar və mayelərlə, müxtəlif avadanlıqlarla işləyin. Təhlil prosesində çirklənmiş ola bilər kitdən istifadə edərkən müəyyən təhlükəsizlik tədbirləri tələb olunur:

İş xüsusi təchiz olunmuş otaqda aparılmalıdır;

, , və tələblərinə uyğun olaraq fərdi qoruyucu vasitələrdən istifadə etməklə və ehtiyat tədbirlərinə riayət etməklə işləmək lazımdır.

3.2 Tərkibində sulfat turşusu olan reagent qıcıqlandırıcıdır. Dəri və selikli qişalarla təmasda olduqda, dərhal bol su ilə yuyun.

3.3 Dəstlə işləyərkən iş yerləri tədarük və egzoz ventilyasiyası ilə təmin edilməlidir.

3.4 Laboratoriyada dəstlərlə işləyən bütün şəxslər tələblərə uyğun olaraq məcburi tibbi müayinədən keçməlidirlər.

3.5 Tibbi tullantılar və/və ya istifadə olunmamış, istifadə müddəti bitmiş dəstlər düzgün şəkildə atılmalıdır.

4 Dəstlə işləmək qaydaları

4.1 Yanlış nəticələri istisna etmək üçün test nümunələri bakteriya böyüməsinin qarşısını alan şəraitdə hazırlanmalı və saxlanmalıdır. Tərkibində yığılmış serum komponentləri və ya çöküntüləri olan zərdab nümunələri 3000 rpm-də (5-10) dəqiqə sentrifuqa edilərək aydınlaşdırılmalıdır. Serum nümunələri (2-8) °C temperaturda 5 gündən çox olmayaraq saxlanıla bilər. Dondurulmuş nümunələr (tercihen ən azı mənfi 20 ° C temperaturda) 1 ildən çox olmayaraq saxlanıla bilər. Nümunələrin təkrar dondurulma-ərimə dövrlərindən qaçınmaq lazımdır.

Yadda saxlamaq lazımdır ki, hemoliz, hiperlipidemiya, bakteriya artımı olan, eləcə də uzun müddət dondurulmadan saxlanılan nümunələr analiz üçün uyğun deyil.

Nəticələrin etibarlılığı aşağıdakı qaydalardan asılıdır:

İstifadə müddəti bitdikdən sonra dəsti istifadə etməyə, həmçinin müxtəlif seriyalardan olan dəstlərin komponentlərini qarışdırmağa icazə verilmir;

Hər bir reagentin hazırlanması üçün ayrıca qab istifadə edilməlidir;

Reagentlərin hazırlanması üçün istifadə olunan bütün qabları dezinfeksiyaedici və yuyucu vasitələrlə müalicə etməyin. Lazım gələrsə, içməli su ilə yuyun və sonra distillə edilmiş su ilə beş dəfə yuyun;

TMB və RX xromogenləri ilə işləmək üçün məhlullar, pipet ucları və qablar üçün ayrıca qablardan istifadə etmək lazımdır.

Reagentlərin hərtərəfli qarışdırılmasına diqqət yetirilməlidir;

Lövhənin quyularının məhlullar və reagentlərlə doldurulması və boşaldılması arasındakı vaxt ən azı 30 s olmalıdır. ELISA təyininin bütün mərhələlərində quyuların qurudulmasına icazə verilmir;

Yuyucudan istifadə edərkən, boşqabın və birləşdirici şlanqların yuyulması üçün məhlul qabının vəziyyətinə nəzarət edin: onlar bakteriya və ya göbələk artımı əlamətləri göstərməməlidir;

Orta dozanın dəyəri və pipetləmə nəticələrinin yaxınlaşması (səhv 3% -dən çox olmayan) ilə təsdiqlənmiş, dəyişdirilə bilən ucları olan avtomatik pipetlərdən istifadə etmək lazımdır;

Dispenserlər və iş səthləri etil spirtinin 70% həcmli bir həlli ilə müalicə edilməlidir. Xloramin və digər xlor tərkibli maddələrdən istifadə etməyin;

Test və nəzarət nümunələri ilə işləmək üçün birdəfəlik pipet uclarından istifadə etmək tövsiyə olunur. Hər bir zərdab nümunəsi, həmçinin dəst reagentləri ayrıca ucluq ilə toplanmalıdır.

PK-1 quyularına yeridərkən, pipetin ucu ilə tabletin səthinə və quyulardakı məhlula toxunmayın.

Təhlil zamanı iş səthində birbaşa günəş işığından qaçın.

4.2 Liyofilləşdirilmiş komponentləri açarkən və həll edərkən flakonların qapağında və divarlarında quru maddənin qalmamasını təmin etmək lazımdır.

5 Təhlil üçün tələb olunan avadanlıq və materiallar

5.1 450 nm dalğa uzunluğunda planşetin quyularında məhlulların optik sıxlığını ölçməyə imkan verən şaquli skanerli spektrofotometr;

Tabletlərin yuyulması üçün yarı və ya avtomatik cihaz (yuyucu);

TC-80 M2 tipli quru hava termostatı, temperaturu (37 ± 1) ° C və ya oxşar xüsusiyyətlərə malikdir;

0,01-dən 5,0 ml-ə qədər maye həcmini götürməyə imkan verən dəyişdirilə bilən ucları olan bir kanallı avtomatik pipetlər;

0,5 ml-ə qədər maye həcmini seçməyə imkan verən dəyişdirilə bilən ucları olan 8 kanallı avtomatik pipetlər;

2000 ml tutumlu ölçmə silindri;

2000 ml tutumlu laboratoriya kolbası;

20 ml tutumlu şüşə butulkalar;

Reagentlər və ya Petri qabları üçün qablar (diametri 100 mm);

Pambıq yun tibbi higroskopik;

filtr kağızı;

rezin cərrahi əlcəklər;

70% etil spirtinin həcm hissəsi olan məhlul;

6% hidrogen peroksidin kütlə payı olan məhlul;

deionlaşdırılmış və ya distillə edilmiş su;

bərk tullantıların toplanması üçün konteyner;

Maye tullantıların boşaldılması üçün konteyner.

6 Təhlil üçün hazırlıq

6.1 Analiz etməzdən əvvəl reagent dəstini soyuducudan çıxarın, qutunun qapağını açın və dəstin komponentlərini temperaturda saxlayın. (18-25) °C 30 dəqiqə.

Təhlildən əvvəl bütün serum (plazma) nümunələrini və reagentləri hərtərəfli qarışdırın.

İstifadə olunan zolaqların sayı ilə müəyyən edilən sınaq dəstinin reagent sərfi Əlavə A-nın Cədvəl A.1-də verilmişdir.

6.2 Plitələrin yuyulması üçün məhlulun hazırlanması

Diqqət! Analiz başlamazdan 15 dəqiqə əvvəl boşqabın yuyulması üçün həll hazırlayın!

FSB-T × 25 olan flakonda çöküntü varsa, istifadə etməzdən əvvəl çöküntü tamamilə həll olunana qədər (37 ± 1) ° C temperaturda qızdırılmalıdır. 2000 ml tutumlu bir ölçmə silindrinə FSB-T × 25 ilə flakonun tərkibini əlavə edin, sonra işarəyə distillə edilmiş su əlavə edin. 1250 ml və məhlulu yavaşca qarışdırın. Məhlul (2-8) °C temperaturda 72 saat saxlanıla bilər.

Bir və ya bir neçə zolaqdan istifadə edildikdə, flakonun içindəkiləri FSB-T × 25 ilə (20-30) s güclü silkələyin, məhlulun tələb olunan həcmini (Cədvəl A.1) ölçmə qabına və ya silindrinə götürün. , lazımi miqdarda distillə edilmiş su əlavə edin və məhlulu qarışdırın. İstifadə edilməmiş FSB-T×25 qapalı flakonda (2-8) °C temperaturda dəstin yararlılıq müddəti ərzində saxlanıla bilər.

6.3 İmmunosorbent preparatı

İmmunosorbent istifadəyə hazırdır.

Paketi açın və lazımi sayda zolaqları çərçivəyə quraşdırın. Qalan zolaqları quruducu ilə sıx bağlanmış torbada (2-8) °C temperaturda 3 ay saxlayın.

6.4 K + AT, K - , RK-1, PP-K2, BRS və dayandırıcı reagentin hazırlanması

K + AT, K - , RK-1, RR-K2, BRS və dayandırıcı reagent istifadəyə hazırdır.

Diqqət! RK-1 ilə flakonda yağıntı mümkündür. Təhlil üçün supernatant istifadə edilməlidir.

İstifadə olunmamış RK-1, PP-K2, BRS və flakonlar açıldıqdan sonra dayandırıcı reagent dəstin yararlılıq müddəti ərzində (2-8) °C temperaturda qapalı flakonlarda saxlanıla bilər.

Qalan K + AT və K - flakon açıldıqdan sonra dəstin istifadə müddəti ərzində (2-8) ° C temperaturda qapalı flakonlarda saxlanıla bilər.

6.5 K + AG məhlulunun hazırlanması

Diqqət! K + AG məhlulu analiz başlamazdan 15 dəqiqə əvvəl hazırlanmalıdır!

Liyofilləşdirilmiş K + AG-ni bərpa etmək üçün flakonu açmazdan əvvəl flakonun və ya tıxacın divarlarına yapışan hissəcikləri silkələmək üçün yüngülcə vurun. Flakonu açın və mantarı baş aşağı quru bir səthə qoyun. Flakona 0,8 ml distillə edilmiş su əlavə edin. Flakonu mantarla bağlayın, (18-25) ° C temperaturda 10 dəqiqə saxlayın və flakonu yumşaq bir şəkildə əyin və fırladın, içindəkini tamamilə həll olunana qədər qarışdırın, köpük əmələ gəlməsinə yol verməyin.

Hazırlanmış K + AG qapalı flakonda (2-8) ° C temperaturda bir ay, mənfi 20 ° C temperaturda - altı ay saxlanıla bilər. Bərpa edilmiş K + AG-nin tək dondurulmasına icazə verilir.

6.6 Kg-2 məhlulunun işçi seyreltmədə hazırlanması

Cədvəl A.1-də göstərilən həcmi Kg-2 olan flakondan götürün və PP-K2 olan flakona köçürün. Köpük əmələ gəlməməsi üçün flakonun tərkibini hərtərəfli qarışdırın.

Bir və ya bir neçə zolaqdan istifadə olunarsa, lazımi miqdarda PP-K2-ni təmiz flakona götürün, Cədvəl A.1-ə uyğun olaraq Kg-2 əlavə edin və məhlulu köpüklənmədən qarışdırın.

Diqqət!İşçi seyreltmədə Kg-2 məhlulu istifadədən dərhal əvvəl hazırlanır! İşçi seyreltmədə Kg-2 məhlulu (18-25) °C temperaturda 15 dəqiqə saxlanıla bilər. Yalnız yeni reagent qabından və yeni məsləhətlərdən istifadə edin!

Kg-2-nin qalan hissəsi qapalı flakonda (2-8) °C temperaturda dəstin son istifadə müddəti ərzində saxlanıla bilər.

6.7 İşçi substrat məhlulunun hazırlanması

TMB xromogeni olan şüşə istifadə etməzdən əvvəl (37±1) temperaturda qızdırılmalıdır.° C kristallar tam həll olunana qədər.

TMB xromogeni olan flakondan Cədvəl A.1-də göstərilən həcmi götürün və BRS ilə flakona köçürün. Köpük əmələ gəlməməsi üçün flakonun tərkibini hərtərəfli qarışdırın.

Bir və ya bir neçə zolaq istifadə edilərsə, lazımi miqdarda BRS-i təmiz flakona götürün, Cədvəl A.1-ə uyğun olaraq TMB xromogen əlavə edin və məhlulu köpüklənmədən qarışdırın.

Diqqət! Substratın işçi həlli işıqdan qorunan yerdə istifadə edilməzdən dərhal əvvəl hazırlanır! Məhlul 20 dəqiqə (18-25) ° C temperaturda işıqdan qorunaraq saxlanıla bilər.

Məhlul işıqdan və metallar və ya metal ionları ilə təmasdan qorunmalıdır. İstifadədən əvvəl substrat məhlulu rəngsiz olmalıdır. Reaksiya zamanı substrat məhlulu ilə təmasda olacaq qablar sintetik yuyucu vasitələrdən istifadə edilmədən yuyulmalıdır. Yalnız yeni reagent qabından və yeni məsləhətlərdən istifadə edin!

TMB xromogeninin qalan hissəsi qapalı flakonda (2-8) °C temperaturda dəstin son istifadə tarixi ərzində saxlanıla bilər.

7 Plitələrin yuyulması tələbləri

Yuyulmanın bütün mərhələlərində bütün quyuların doldurulmasına və onlardan mayenin tam çıxarılmasına (aspirasiyasına) nəzarət etmək lazımdır;

Hər yuyulma zamanı qonşu quyulardan mayenin daşmadan və daşmadan bütün quyuları kənarına qədər məhlulla (hər quyuya 0,30-0,35 ml) doldurmaq lazımdır;

Quyuları boşqab yuma məhlulu ilə dolu 30 s saxlayın;

Hər bir aspirasiya ilə, bir neçə dəfə qatlanmış, polietilen vərəqinə qoyulmuş filtr kağızının üzərinə tərs vəziyyətdə zolaqlar olan çərçivəyə vuraraq qalan mayeni quyulardan diqqətlə çıxarın;

Plitənin zəif yuyulması yanlış nəticələrə gətirib çıxarır.

8 Təhlillərin aparılması

8.1 Planşetin istənilən iki quyusuna əlavə edin 0,07 ml(70 µl) K + AT, digər iki quyuda - by 0,07 ml(70 µl) K + AG, digər üç çuxurda - tərəfindən 0,07 ml(70 µl) TO - .

Diqqət! ELISA-nı bir zolaqda qurarkən K - - bir quyu, K + AT üçün - bir quyu, K + AG üçün - bir quyu üçün iki quyudan istifadə etməyə icazə verilir.

Tabletin qalan quyularına əlavə edin 0,07 ml(70 µl) insan serumunun (plazmasının) tədqiq edilmiş nümunələri.

Diqqət! Hər bir nümunə birdəfəlik ucluqla götürülməlidir!

8.2 Nəzarət nümunələri və qan serumunun (plazma) sınaq nümunələri üzərindən tabletin bütün quyularına dərhal tərəfindən töhfə 0,05 ml(50 µl) RK-1. Plitənin kənarlarına yumşaq bir şəkildə vuraraq quyuların məzmununu qarışdırın.

8.3 (37 ± 1) ° Daxilindən, içərisindən, dərinliklərindən 60 dəq.

Diqqət!İnkubasiya bitməzdən əvvəl (1-2) dəqiqə ərzində işçi seyreltmədə Kr-2 məhlulu hazırlayın (bölmə 6.6).

8.4 Quyuların içindəkiləri yuyucu ilə çıxarın, sonra boşqabın quyularını boşqab yuma məhlulu ilə yuyun (bölmə 6.2). yeddi dəfə.

8.5 Plitənin bütün quyularına əlavə edin 0,15 ml(150 µl) məhlul kq-2 işçi heyvandarlıqda (6.6-cı bənd).

8.6 Plitəni bir filmlə bağlayın və ya qapaq ilə örtün və bir temperaturda termostatda inkubasiya edin (37 ± 1) ° Daxilindən, içərisindən, dərinliklərindən 10 dəqiqə.

8.7 Lövhənin quyularının tərkibini yuyucu ilə çıxarın, sonra boşqabların quyularını boşqabın yuyulması üçün məhlulla yuyun (bölmə 6.2). yeddi dəfə.

8.8 Planşetin bütün quyularına daxil edin 0,15 ml(150 µl) substratın işləmə həlli(6.7-ci bənd).

Substratın işçi həllini hazırlayarkən (maddə 6.7) f TMB xromogenli lakonu istifadə etməzdən əvvəl (3-5) dəqiqə (37) temperaturda qızdırmaq lazımdır.± 1) kristallar tamamilə həll olunana qədər ° C.

8.9 Plitəni bir filmlə bağlayın və ya qapaq ilə örtün və bir temperaturda termostatda inkubasiya edin (37 ± 1) ° ilə üçün qaranlıq yerdə 15 dəqiqə.

Diqqət! Tərkibində HİV-1 və/yaxud HİV-2 və/və ya HİV-1 p24 antigeninə qarşı antikorları olan zərdab nümunələri olan quyularda inkubasiyanın sonunda məhlulun rəngi onun konsentrasiyasından asılı olaraq müxtəlif intensivlikdə rəngsizdən maviyə dəyişəcək. test serum nümunəsində antikorlar və/və ya antigen.

8.10 Bütün quyulara əlavə etməklə peroksidaza reaksiyasını dayandırın 0,05 ml(50 µl) reagenti dayandırın.

Diqqət! HİV-1 və/və ya HİV-2 və/və ya HİV-1 p24 antigeninə qarşı antikorları olan serum nümunələri olan quyular məhlulun rəngini müxtəlif intensivlikdə mavidən sarıya dəyişəcək.

8.11 Reaksiya dayandırıldıqdan sonra (1-2) dəqiqədən gec olmayaraq, dalğa uzunluğunda birdalğalı rejimdə quyularda OD müəyyən edilir. 450 nm.

9 Təhlil nəticələrinin emalı

9.2 Nəticələr yalnız aşağıdakı hallarda nəzərə alınır:

OPsr K dəyəri - 0,2 OE-dən çox deyil;

OP K-nin hər bir fərdi dəyəri - OPs K-dən kənara çıxmamalıdır - 30% -dən çox. OP K-nin üç dəyərindən biri bu həddi aşarsa, o, K - OP-lərin hesablanmasından xaric edilməlidir. Üç ODK dəyərindən ikisi bu həddən kənardırsa, analiz yeni reagentlər dəstində təkrarlanmalıdır;

OPsr K + AT dəyəri 1,0 OE-dən çox;

OPsr K + AG dəyəri 1.0 OE-dən çoxdur.

9.3 Yuxarıdakı şərtlər yerinə yetirilərsə, düstura (1) uyğun olaraq kritik dəyəri (OPcrit.), OE hesablayın:

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Analitik və diaqnostik xarakteristikalar

Həssaslıq reagent dəsti ELISA-HIV 1.2 AGAT HİV-1 p24 antigeninin aşkarlanması üçün -

Spesifiklik reagent dəsti ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100% Standart AT(-)HİV. Birinci və ikinci növ insanın immunçatışmazlığı virusuna (HİV-1,2) və HİV-1 antigeninə (p24) qarşı antikorları olmayan standart sera paneli. QSC MBS.

11 Kitin buraxılış forması

11.1 Dəst beş konfiqurasiyada mövcuddur:

1 dəst 1P - əl analizi. Dəst yığıla bilən lövhədə 12 ELISA qaçışı üçün nəzərdə tutulmuşdur: 1 qaçış - 1 zolaq (8 deşik). Ümumilikdə - nəzarət nümunələri daxil olmaqla 96 təyinat;

2 dəst 2M - əl ilə analiz. Dəst monolit plitələrdə 2 ELISA qaçışı üçün nəzərdə tutulmuşdur: 1 qaçış - 1 boşqab. Cəmi - nəzarət nümunələri daxil olmaqla 192 təyinat;

3 2P təyin edin- əl analizi. Dəst tutmaq üçün nəzərdə tutulmuşdur 24 istehsal 2 üçün ELISA yıxıla bilən x tabletlər: 1 qəbulu - 1 zolaq (8 deşik). Ümumi - 192 təriflər, o cümlədən nəzarət nümunələri;

4 dəst A2M - avtomatik analizatorda analiz. Dəst monolit plitələrdə 2 ELISA qaçışı üçün nəzərdə tutulmuşdur: 1 qaçış - 1 boşqab. Cəmi - nəzarət nümunələri daxil olmaqla 192 təyinat;

5 dəst A2P - avtomatik analizatorda analiz. Dəst 2 yığıla bilən lövhədə 24 ELISA qaçışı üçün nəzərdə tutulmuşdur: 1 qaçış - 1 zolaq (8 deşik). Nəzarət nümunələri daxil olmaqla cəmi 192 təyinat.

12 Kitin saxlanma və istifadə şərtləri

12.1 Kit bütün saxlama müddəti ərzində təmiz, nəmdən və işıqdan qorunan otaqda (2-8) ° C temperaturda saxlanmalıdır. Kit komponentlərini dondurmayın.

12.2 Etibarlı nəticələr əldə etmək üçün dəstin istifadəsi üçün təlimatlara ciddi riayət etmək lazımdır.

12.3 Kitin istifadə müddəti 12 ay.

Əlavə A

Cədvəl A.1 - ELISA dəstinin reagentlərinin istehlakı

Biblioqrafiya